Ympäristönäytteet Taustaa - Ympäristöohjeet Ohjekirjasto - Tartuntakontrolli

2023 Kirjoittaja: Stephanie Arnold | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2023-11-26 09:32

• Yleiset periaatteet: Ympäristön mikrobiologinen näytteenotto
• Ilmanäytteet
• Laatikko 13. Alustavat huolet ilmanäytteiden ottamisesta
• Taulukko 23. Ilmanäytteenottomenetelmät ja esimerkit laitteista
• Laatikko 14. Ilmanäytteenottolaitteen valinta
• Vedenäytteet
• Ympäristöpinta - näytteenotto
• Laatikko 15. Ympäristöpinnan näytteenotto
• Taulukko 24. Esimerkkejä eluenteista ja laimentimista ympäristön pinnan näytteenottoa varten
• Taulukko 25. Ympäristön pinnan näytteenottomenetelmät

Tämä osan I osa käsittelee ympäristöpintojen ja muiden ympäristön lähteiden näytteenottoperiaatteita ja -menetelmiä mikro-organismeille. Ympäristöinfektioiden torjuntaan sovellettavia näytteenottostrategioita on käsitelty asianmukaisissa edellisissä kohdissa.

1. Yleiset periaatteet: Ympäristön mikrobiologinen näytteenotto

Ennen vuotta 1970 yhdysvaltalaiset sairaalat harjoittivat säännöllisesti ilman ja ympäristön pintojen (esim. Lattiat, seinät ja pöydät) viljelyä. ¹²⁰² Vuoteen 1970 mennessä CDC ja American Hospital Association (AHA) puoltoivat rutiiniympäristön viljelyn lopettamista, koska terveydenhuoltoon liittyvien infektioiden määrää ei ollut liitetty ilma- tai ympäristöpintojen yleiseen mikrobikontaminaation tasoon ja koska sallitut sallitut standardit ympäristöpintojen tai ilman mikrobikontaminaatiotasoja ei ollut. ^1203–1205 Vuosina 1970–1975 25% Yhdysvaltain sairaaloista vähensi tällaisen rutiininomaisen ympäristön viljelyn laajuutta - suuntaus on jatkunut. ^{1206, 1207}

Satunnainen, suuntaamaton näytteenotto (aiemmissa ohjeissa viitataan rutiiniksi) eroaa nykyisestä käytännöstä, jossa kohdennettu näytteenotto on määriteltyihin tarkoituksiin. ^{2, 1204} Aikaisemmin suosituksia rutiininäytteitä vastaan ei ollut tarkoitus estää käyttämästä näytteitä, joissa näytteenotto, viljely ja tulkinta suoritetaan määriteltyjen menettelytapojen mukaisesti. ² Tässä ohjeessa kohdennettu mikrobiologinen näytteenotto tarkoittaa seurantaprosessia, joka sisältää

1. kirjallinen, määritelty, monitieteinen protokolla näytteenottoa ja viljelyä varten
2. tulosten analysointi ja tulkinta vertaamalla käyttämällä tieteellisesti määritettyjä tai ennakoivia lähtöarvoja; ja
3. odotettavissa olevat toimet saatujen tulosten perusteella.

Tartuntavalvonnan tulisi yhdessä laboratorioiden kanssa arvioida terveydenhoitolaitoksen kyky suorittaa näytteenottoa ja määrittää milloin tarvitaan asiantuntijakonsultaatio ja / tai palvelut.

Sivun yläreunassa

Ilman, veden ja elottomien pintojen mikrobiologinen näytteenotto (ts. Ympäristönäytteet) on kallis ja aikaa vievä prosessi, jota monimutkaiset ovat monimutkaiset protokollassa, analyysissä ja tulkinnassa. Siksi se on tarkoitettu vain neljään tilanteeseen. ¹²⁰⁸ Ensimmäinen ^tavoite on tukea sairauden tai tartuntojen puhkeamisen tutkimusta, kun ympäristövarastot tai fomiitit ovat epidemiologisesti mukana tautien leviämisessä. ^{161, 1209, 1210} on tärkeää, että tällaista viljelyä tuetaan epidemiologisilla tiedoilla. Ympäristönäytteitä, kuten kaikkia laboratoriotestejä, ei pitäisi suorittaa, jos saatujen tulosten tulkitsemista ja käyttämistä ei suunnitella. ^{11, 1211, 1212} Ympäristönäytteiden mikro-organismien yhdistäminen kliinisiin isolaateihin molekyyli-epidemiologian avulla on välttämätöntä aina, kun se on mahdollista.

Toinen tilanne, josta ympäristönäytteiden ottaminen voi olla perusteltua, on tutkimus. Hyvin suunnitellut ja hallitut kokeelliset menetelmät ja lähestymistavat voivat tarjota uutta tietoa terveydenhuoltoon liittyvien sairauksien leviämisestä. ^{126, 129} Klassinen esimerkki on ympäristömikrobikontaminaation tutkimus, jossa verrattiin terveydenhuoltoon liittyvien tartuntojen määrää vanhassa sairaalassa ja uudessa laitoksessa ennen miehitystä ja pian sen jälkeen. ⁹⁴⁷

Kolmas näytteenoton indikaattori on seurata mahdollisesti vaarallisia ympäristöolosuhteita, vahvistaa vaarallisen kemiallisen tai biologisen aineen esiintyminen ja vahvistaa vaaran onnistunut vähentäminen. Tämän tyyppistä näytteenottoa voidaan käyttää:

1. havaita terveydenhuollon laitteiden (esim. ultraäänipuhdistimen) toiminnasta vapautuneet bioaerosolit ja selvittää korjausten onnistuminen vaaran rajoittamisessa, ¹²¹³
2. - havaita bioterrorismin aiheuttajan vapautuminen sisäympäristössä ja määrittää sen onnistunut poistaminen tai inaktivointi, ja -
3. näyte työhygieniaa tai turvallisuutta varten (esim. sairaan rakennuksen tarkkailu).

Sivun yläreunassa

Neljäs indikaattori on laadunvarmistus tartunnan torjunnan käytäntöjen muutoksen vaikutusten arvioimiseksi tai sen varmistamiseksi, että laitteet tai järjestelmät toimivat määritelmien ja odotettujen tulosten mukaisesti. Kaikkien laadunvarmistustarkoituksiin käytettävien näytteenottojen on oltava seuraamalla kunnollisia näytteenottomenetelmiä ja käsiteltävä hämmentäviä tekijöitä käyttämällä oikein valittuja säätimiä. Yhden ympäristönäytteen tuloksia on vaikea tulkita ilman viitekehystä tai perspektiiviä. Infektioiden torjuntakäytännön muutoksen arvioinnit perustuvat oletukseen, että vaikutus mitataan rajoitetun ajan, yleensä lyhyen ajan. Laadunvarmistusnäytteen ottaminen laaja-alaisesti, etenkin jos kielteisiä tuloksia ei ole, ei yleensä ole perusteltua. Mahdollinen poikkeus voi olla ilmanäytteiden käyttö suurten rakennuskausien aikana ympäristön tartuntojen torjuntatoimenpiteiden rikkomusten kvalitatiivisen havaitsemiseksi. Yhdessä tutkimuksessa, joka aloitettiin osana terveydenhuoltoon liittyvän aspergilloosin puhkeamista, mitattiin Aspergillus-itiöiden pitoisuuksia ilmassa pyrkiessä arvioimaan sairaalan ovien ja ikkunoiden tiivistämisen tehokkuutta läheisen rakennuksen rakennusvaiheen aikana. ⁵⁰ Muita esimerkkejä laadunvarmistustarkoituksiin käytettävistä näytteistä voivat olla vastikään rakennetun tilan käyttöönotto erityisillä hoitoalueilla (ts. OR-alueet ja yksiköt immunosuppressiopotilaille) tai taloudenhoitokäytännön muutoksen arviointi. Laadunvarmistusohjelmaan suositellaan kuitenkin vain rutiininomaisia ympäristömikrobiologisia näytteenototyyppejä

1. - sterilointiprosessien biologinen seuranta käyttämällä bakteerien itiöitä ¹²¹⁴ ja
2. hemodialyysisovelluksissa ja lopullisessa dialysaatin käyttölaimennuksessa käytetyn veden kuukausittainen viljely.

Jotkut asiantuntijat suosittelevat myös säännöllistä ympäristönäytteenottoa mikrobien / hiukkasten laadun arvioimiseksi ilmankäsittelyjärjestelmän säännöllisessä kunnossapidossa (esim. Suodattimet) ja sen varmistamiseksi, että järjestelmän komponentit täyttävät valmistajan vaatimukset (A. Streifel, Minnesotan yliopisto, 2000).. Tietyt terveydenhuollon ympäristössä olevat laitteet (esim. Biologiset turvakaapit) voidaan myös valvoa ilmanvirtauksella ja hiukkasnäytteillä suorituskyvyn määrittämiseksi tai osana sertifiointiohjelman noudattamista; tuloksia voidaan sitten verrata ennalta määrättyyn suorituskykystandardiin. Nämä mittaukset eivät kuitenkaan yleensä vaadi mikrobiologista testausta.

Sivun yläreunassa

2. Ilmanäytteet

Biologisia epäpuhtauksia esiintyy ilmassa aerosoleina ja niihin voi sisältyä bakteereja, sieniä, viruksia ja siitepölyjä. ^{1215, 1216} Aerosolit on karakterisoitu kiinteiksi tai nestemäisiksi hiukkasiksi, jotka ovat suspendoituneet ilmaan. 5 minuutin puhuminen ja yskiminen voivat tuottaa 3000 pisaran ydintä; aivastelu voi tuottaa noin 40 000 pisaraa, jotka sitten haihtuvat hiukkasiksi kokoalueella 0, 5–12 μm. ^{137, 1217} Biologisen aerosolin hiukkasten koko vaihtelee yleensä <1 μm - ≥ 50 μm. Nämä hiukkaset voivat koostua yhdestä, kiinnittymättömästä organismista tai ne voivat esiintyä joukkona bakteereita koostuvina kohoumina. Klumput voivat sisältää myös pölyä ja kuivattua orgaanista tai epäorgaanista materiaalia. Bakteerisolujen ja virusten kasvillisia muotoja ja viruksia voi esiintyä ilmassa vähemmän kuin bakteerien itiöitä tai sieni-itiöitä. Tekijöitä, jotka määräävät mikro-organismien selviytymisen bioaerosolissa, ovat

1. suspendoiva väliaine,
2. lämpötila,
3. suhteellinen kosteus,
4. happiherkkyys ja
5. altistuminen UV- tai sähkömagneettiselle säteilylle. ¹²¹⁵

Monet kasvulliset solut eivät selviä pitkään ilmassa, ellei suojapeite (esim. Kuivatut orgaaniset tai epäorgaaniset aineet). ¹²¹⁶ Kuivausta vastustavat patogeenit (esim. Staphylococcus spp., Streptococcus spp. Ja sieni-itiöt) voivat säilyä pitkään ja ne voivat kulkeutua huomattavan matkan päässä ilmasta ja pysyä silti elinkelpoisina. Ne voivat myös asettua pinnoille ja tulla takaisin ilmaan toissijaisina aerosoleina tiettyjen toimintojen (esim. Pyyhkäisyn ja sängynmuodostuksen) aikana. ^{1216, 1218}

Sivun yläreunassa

Mikrobiologista ilmanäytteenottoa käytetään tarvittaessa sisäilman mikro-organismien tai hiukkasten määrän ja tyypin määrittämiseen. ²⁸⁹ Ilmanäytteet laadunvalvontaa varten ovat kuitenkin ongelmallisia, koska puuttuvat yhtenäiset ilmanlaatuvaatimukset. Vaikka Aspergillus spp. voi aiheuttaa riskin neutropeniapotilaille, näiden itiöiden kriittistä lukumäärää (ts. toiminta-tasoa), jonka yläpuolella aspergilloosin puhkeamisen odotetaan tapahtuvan, ei ole määritelty. Ilmanäytteiden käyttöä harkitsevien terveydenhuollon ammattilaisten tulisi pitää mielessä, että tulokset edustavat sisäilman laatua yksittäisissä vaiheissa ja että niihin voivat vaikuttaa monet tekijät, mukaan lukien

1. sisäliikenne,
2. vierailijat saapuvat tilaan,
3. lämpötila,
4. kellonaika tai vuosi,
5. suhteellinen kosteus,
6. hiukkasten tai organismien suhteellinen pitoisuus ja g) ilmankäsittelyjärjestelmän komponenttien suorituskyky.

Ilmanäytteen tulokset ovat merkityksellisiä, kun niitä on verrattu muista määritellyistä alueista, olosuhteista tai ajanjaksoista saatuihin tuloksiin.

Suunniteltaessa mikrobiologista ilmanäytteenottostrategiaa on otettava huomioon useita alustavia huolenaiheita (laatikko 13). Koska hiukkasmaisen materiaalin ja bakteerien määrä hengityselimissä on suuresti riippuvainen hengitettävien hiukkasten koosta, partikkelikoko tulisi määrittää tutkittaessa ilmassa olevia mikro-organismeja ja niiden suhdetta hengitystieinfektioihin. Hiukkaset, joiden paksuus on> 5 μm, ovat tehokkaasti loukussa ylähengitysteissä ja poistetaan pääasiassa siliaarisen toiminnan avulla. ¹²¹⁹ Halkaisijaltaan ^pienemmät hiukkaset, joiden halkaisija on ≤5 μm, saavuttavat keuhkon, mutta alveoleissa suurin pidätys on hiukkasilla, joiden halkaisija on 1–2 μm. ^1220-1222

Sivun yläreunassa

Laatikko 13. Alustavat huolet ilmanäytteiden ottamisesta

• Harkitse aerosolin mahdollisia ominaisuuksia ja olosuhteita, mukaan lukien hiukkasten kokoalue, inertin materiaalin suhteellinen määrä, mikro-organismien pitoisuus ja ympäristötekijät.
• Määritä näytteenottolaitteiden tyyppi, näytteenottoaika ja näytteenotto-ohjelman kesto.
• Määritä otettavien näytteiden lukumäärä.
• Varmista, että riittävästi varusteita ja tarvikkeita on saatavana.
• Määritä määritysmenetelmä, joka varmistaa mikro-organismien optimaalisen palautumisen.
• Valitse laboratorio, joka tarjoaa asianmukaista mikrobiologista tukea.
• Varmista, että näytteet voidaan jäähdyttää, jos niitä ei voida määrittää laboratoriossa nopeasti.

Sivun yläreunassa

Ilmassa olevat bakteerit, sienet ja hiukkaset voidaan tunnistaa ja kvantifioida samoilla menetelmillä ja laitteilla (taulukko 23). Perusmenetelmiin sisältyy

1. vaikutukset nesteisiin,
2. isku kiinteille pinnoille,
3. sedimentaatio,
4. suodattamalla,
5. sentrifugoinnin
6. - sähköstaattinen saostus ja -
7. lämpösateet. ¹²¹⁸

Näistä nesteisiin kohdistuvaa vaikutusta, iskuja kiinteille pinnoille ja sedimentaatiota (laskeumalevyillä) on käytetty erilaisiin ilmanäytteisiin terveydenhuollon ympäristöissä. ²⁸⁹

Ilma-bakteereista ja sienistä voidaan ottaa näytteitä useita välineitä (laatikko 14). Jotkut näytteenottimista ovat itsenäisiä yksiköitä, jotka vaativat vain virtalähteen ja asianmukaisen keräysväliaineen, mutta useimmat vaativat lisäapulaitteita (esim. Tyhjiöpumppu ja ilmavirran mittauslaite (ts. Virtausmittari tai anemometri)). Sedimentointi- tai kerrostamismenetelmissä käytetään settilevyjä, joten ne eivät tarvitse erityisiä instrumentteja tai laitteita. Ilmanäytteenottovälineen valinta edellyttää selkeää ymmärrystä halutun tiedon tyypistä ja erityisistä määrityksistä, jotka on tehtävä (laatikko 14). Tietoja voidaan tarvita

1. yksi tietty organismi tai kaikki organismit, joita voi olla ilmassa,
2. elävien hiukkasten tai elävien organismien pitoisuus,
3. keskittymisen muutos ajan myötä, ja -
4. kerättyjen hiukkasten kokojakauma.

Ennen näytteenoton aloittamista olisi tehtävä päätös siitä, onko tulokset laadullisia vai määrällisiä. Ilmassa olevien mikro-organismien määrien vertaaminen ulkoilman vastaaviin on myös tavanomainen toimintatapa. Tartunnanvalvontaammattilaisten, sairaalaepidemiologien, teollisuushygienistien ja laboratoriovalvojien olisi osana monialaista ryhmää keskusteltava mahdollisesta mikrobien ilmannäytteiden tarpeesta selvittääkseen, onko laitoksessa kykyä ja asiantuntemusta tällaisen näytteenoton suorittamiseen ja milloin se on. on tarkoituksenmukaista ottaa käyttöön ympäristömikrobiologin konsultin palvelut.

Sivun yläreunassa

Taulukko 23. Ilmanäytteenottomenetelmät ja esimerkit laitteista *

Näytteenottomenetelmät sekä kuvaukset ja näytteenottajat jokaiselle.

Menetelmä	Periaate	Soveltuu mittaukseen:	Keräysmateriaali tai pinta	Keruunopeus (L / min)	Lisälaitteita tarvitaan +	Huomioon otettavat seikat	Prototyyppinäytteet§
Vaikutus nesteisiin	Ilma johdetaan pienen suihkun läpi ja suunnataan nestemäistä pintaa vasten	Elävät organismit ja pitoisuus ajan myötä. Esimerkki käyttö: Vesipitoisten aerosolien näytteenotto Legionella spp.	Puskuroitu gelatiini, tryptose suolaliuos, peptoni, ravinnelieme	12.5	Joo	Vaahdotuksenestoaineita voidaan tarvita. Ympäristön lämpötila ja kosteus vaikuttavat keräysajan pituuteen	Chemical Corps. Kaikki lasisimpuri (AGI)
Vaikutus kiinteisiin pintoihin	Ilma vedettiin näytteenottaja; hiukkaset, jotka laskeutuvat kuivalle pinnalle	Elävät hiukkaset; kannattava organismit (ravinteettomilla pinnoilla, rajoitettuna organismeihin, jotka kestävät kuivumista ja itiöitä); koon mittaus ja pitoisuus ajan myötä. Esimerkki käyttö: näytteenottoilma Aspergillus spp., Sieni-itiöt	Kuiva pinta, pinnoitetut pinnat ja agar	28 (seula) 30–800 (viilto)	Joo	Saatavana seula- tai ura-iskulaitteina. Seula-iskulaitteet voidaan asettaa mittaamaan hiukkaskokoa. Rakoisilla iskulaitteilla on pyörivä tukiaste agarmaljoille, jotta pitoisuus voidaan mitata ajan myötä.	Andersen Air Sampler (seula-iskulaite); TDL, Cassella MK 2 (rako-iskulaitteet)
Sedimentaatio	Hiukkaset ja mikro-organismit asettuvat pinnoille painovoiman kautta	Elävät hiukkaset. Esimerkkejä käyttökohteista: ilman näytteenotto bakteereista lääketieteellisen toimenpiteen läheisyydessä ja sen aikana; mikrobien ilmanlaadun yleiset mittaukset.	Ravintoliuos (agarit) maljoilla tai levyillä	n / a	Ei	Yksinkertainen ja edullinen; sopii parhaiten laadulliseen näytteenottoon; merkittävät ilmassa olevat sieni-itiöt ovat liian kelluvia asettuakseen tehokkaasti keräykseen tällä menetelmällä.	Aseta levyt
suodatus	Ilma suodatetaan suodatinyksikön läpi; hiukkaset loukkuun; 0, 2 um huokoskoko	Elävät hiukkaset; elinkykyiset organismit (ravinteettomilla pinnoilla, rajoitetut itiöihin ja kuivumista estäviin organismeihin); keskittyminen ajan myötä. Esimerkki käyttö: Ilmanäytteet Aspergillus spp: lle, sieni-itiöt ja pöly	Paperi, selluloosa, lasivilla, gelatiinivaahto ja kalvosuodattimet	1-50	Joo	Suodatinta on ravistettava ensin huuhtelunesteessä tarttuneiden mikro-organismien poistamiseksi ja hajottamiseksi; huuhteluneste määritetään; käytetään enemmän pölyn ja kemikaalien näytteenottoon.	n / a
sentrifugointi	Keskipakovoimaan kohdistetut aerosolit; hiukkaset iskeytyivät kiinteälle pinnalle	Elävät hiukkaset; elinkykyiset organismit (ravinteettomilla pinnoilla, rajoitetut itiöihin ja kuivumista estäviin organismeihin); keskittyminen ajan myötä. Esimerkki käyttö: Ilmanäytteet Aspergillus spp.: Lle ja sieni-itiöt	Päällystetyt lasi- tai muovilasit ja agarpinnat	40-50	Joo	Kalibrointi on vaikeaa, ja se tehdään vain tehtaalla; Ilman epäpuhtauksien suhteellinen vertailu on sen yleinen käyttö.	Biotest RCS Plus
Sähköstaattinen saostus	Ilma vedetään sähköstaattisesti varautuneen pinnan yli; hiukkaset varautuvat	Elävät hiukkaset; elinkykyiset organismit (ravinteettomilla pinnoilla, rajoitetut itiöihin ja kuivumista estäviin organismeihin); keskittyminen ajan myötä	Kiinteät keräyspinnat (lasi ja agar)	85	Joo	Suuri näytteenottotiheys, mutta laitteet ovat monimutkaisia ja niitä on käsiteltävä varovasti. ei käytännöllinen käytettäväksi terveydenhuollossa.	n / a
Lämpösateet	Ilma vedetään lämpögradientin yli; hiukkaset, jotka hylätään kuumilta pinnoilta, laskeutuvat kylmemmille pinnoille	Kokomittaukset	Lasinen kansilasi ja elektronimikroskooppiristikko	+0, 003-+0, 4	Joo	Määritä partikkelikoko suoraan havainnoimalla; ei käytetä usein monimutkaisten säätöjen ja alhaisen näytteenottotaajuuden vuoksi.	n / a

* Tämän taulukon materiaali on koottu viitteistä 289, 1218, 1223 ja 1224.

+ Useimmat näytteenottajat tarvitsevat virtausmittarin tai anemometrin ja tyhjölähteen apulaitteina.

§ Luettelossa mainitut kauppanimet on tarkoitettu vain tunnistustarkoituksiin, eikä niitä ole tarkoitettu Yhdysvaltojen kansanterveyspalvelun hyväksymiksi.

Sivun yläreunassa

Laatikko 14. Ilmanäytteenottolaitteen valinta *

Seuraavat tekijät on otettava huomioon valittaessa ilmanäytteenottolaitetta:

• Näytettävän organismin elinkelpoisuus ja tyyppi
• Yhteensopivuus valitun analyysimenetelmän kanssa
• Hiukkasten herkkyys näytteenotolle
• Oletetut pitoisuudet ja hiukkaskoko
• Pitäisikö ilmassa leviävät hajoamistuotteet hajoamaan (eli elinkykyisten organismien kokonaismäärä vs. hiukkasten lukumäärä)
• Näytteenotettava ilmamäärä ja näytteenottimen pituutta on käytettävä jatkuvasti
• Taustakontaminaatio
• Ympäristön olosuhteet
• Näytekeräystehokkuus
• Näytteenottimen käyttämiseen vaaditaan ponnisteluja ja taitoja
• Näytteenottajan saatavuus ja kustannukset sekä varanäytteenottajat laitteiden toimintahäiriöiden varalta
• Apulaitteiden ja apuohjelmien saatavuus (esim. Tyhjiöpumput, sähkö ja vesi)

* Tämän laatikon materiaali on koottu viitteestä 1218.

Sivun yläreunassa

Nestemäiset immuuninäytteet ja kiinteät iskulaitteet näytteenottimet ovat käytännöllisimpiä bakteerien, hiukkasten ja sieni-itiöiden näytteenottoon, koska ne voivat ottaa näytteitä suurista ilmamääristä suhteellisen lyhyinä ajanjaksoina. ²⁸⁹ Kiinteitä iskulaiteyksiköitä on saatavana joko rako- tai seulamallina. Ura-iskulaitteet käyttävät pyörivää kiekkoa keräilypinnan tukena, mikä mahdollistaa pitoisuuden määrittämisen ajan myötä. Seula-iskulaitteissa käytetään yleisesti vaiheita, joiden kalibroidut reiät ovat halkaisijaltaan erilaisia. Jotkut iskulaitteen tyyppiset näytteenottajat käyttävät keskipakoisvoimaa hiukkasten iskumiseen agarpinnoille. Kummankin laitteen sisäpuoli on tehtävä steriiliksi näytteenottimen tahattoman likaantumisen välttämiseksi. Kummastakin näytteenottolaitteesta saadut tulokset voidaan ilmaista organismeina tai hiukkasina ilmatilavuusyksikköä kohti (CFU / m ³).

Bakteerien näytteenotto vaatii erityistä huomiota, koska bakteereja voi esiintyä yksittäisinä organismeina, kohoumina, sekoittuneina pölyyn tai tarttua niihin tai peittää kuivattujen orgaanisten tai epäorgaanisten aineiden suojakerroksella. Ilmanäytteillä määritettyjen bakteeripitoisuuksien raporttien on siksi ilmoitettava, edustavatko tulokset yksittäisiä organismeja vai hiukkasia, joissa on useita soluja. Tietyntyyppiset näytteenottimet (esim. Nestemäiset roiskeet) hajottavat kokonaan tai osittain kohoumia ja suuria hiukkasia; näytteenoton tulos heijastaa siis ilmassa olevien yksittäisten organismien kokonaismäärää.

Bioaerosolin mitoittamista on yksinkertaistettu käyttämällä seuloja tai viilu-iskulaitteita, koska nämä näytteenottajat erottavat hiukkaset ja mikro-organismit kokoalueiksi, kun näyte kerätään. Nämä näytteenottajat on kuitenkin kalibroitava ensin ottamalla aerosoleja samanlaisissa käyttöolosuhteissa. ¹²²⁵

Sivun yläreunassa

Asettelulevyjen käyttöä (ts. Sedimentaatio- tai laskeumamenetelmää) ei suositella otettaessa ilmaa sieni-itiöiden varalta, koska yksittäiset itiöt voivat olla suspendoituneita ilmaan toistaiseksi. ²⁸⁹ Jäykkyyslevyjä on käytetty pääasiassa hiukkasten ja bakteerien näytteenottoon joko tutkimuksissa tai epidemiologisissa tutkimuksissa. ^{161, 1226–1229} Sedimentointinäytteiden tulokset ilmaistaan tyypillisesti ^elävien hiukkasten tai ^elävien bakteerien lukumäärällä pinta-alayksikköä kohden näytteenottoajan (ts. CFU / alue / aika); tällä menetelmällä ei voida mitata näytteenotetun ilman määrää. Koska mikro-organismien eloonjääminen ilmanäytteenoton aikana on kääntäen verrannollinen nopeuteen, jolla ilma otetaan näytteenottimeen, ¹²¹⁵ eräs ^{setälevyn käytön} etu on sen riippuvuus painovoimasta organismien ja hiukkasten saattamiseksi kosketukseen sen pinnan kanssa, mikä parantaa kerättyjen organismien optimaalinen selviytymismahdollisuus. Prosessin suorittaminen kestää kuitenkin useita tunteja, ja se voi olla epäkäytännöllinen joissakin tilanteissa.

Ilmanäytteenottajat on suunniteltu vastaamaan erilaisia mittausvaatimuksia. Jotkut näytteenottajat sopivat paremmin yhteen mittausmuotoon kuin toiset. Minkään tyyppisiä näytteenotto- ja määritysmenetelmiä ei voida käyttää 100%: n keräämiseen ja luettelointiin ilmassa olevista organismeista. Valitulla näytteenottimella ja / tai näytteenottomenetelmällä pitäisi kuitenkin olla riittävä näytteenottotaajuus riittävän määrän hiukkasten keräämiseksi kohtuullisessa ajassa, jotta biologista analyysiä varten saadaan edustava ilmanäyte. Uudemmat analyysimenetelmät ilmanäytteiden määrittämiseksi sisältävät PCR-menetelmät ja entsyymisidonnaiset immunosorbenttimääritykset (ELISA).

Sivun yläreunassa

3. Vedenäytteet

Yksityiskohtainen keskustelu vesinäytteenoton periaatteista ja käytännöistä on julkaistu. ^{945 Vedenäytteitä} terveydenhuoltoympäristössä käytetään kliinisesti merkittävien vedessä leviävien patogeenien havaitsemiseksi tai valmiin veden laadun määrittämiseen laitoksen jakelujärjestelmässä. Rutiininomaista veden testausta terveydenhuollon laitoksissa ei yleensä suositeta, mutta puhkeamistutkimusten tueksi otettavat näytteet voivat auttaa määrittämään sopivat tartunnan torjuntatoimenpiteet. Dialyysiasetusten veden laadun arvioinnista on keskusteltu tässä ohjeessa (katso Vesi, Dialyysiveden laatu ja dialysaatti, ja liite C).

Vesinäytteenottoa suorittavien terveydenhuoltolaitosten on näyte analysoitava laboratoriossa, joka käyttää vakiintuneita menetelmiä ja laadunvarmistusmenettelyjä. Vesinäytteet eivät ole”staattisia näytteitä” ympäristön lämpötilassa; mahdolliset muutokset sekä mikrobipopulaatioiden lukumäärässä että tyypissä voivat tapahtua kuljetuksen aikana. Tämän seurauksena vesinäytteet olisi lähetettävä testauslaboratorioon kylmänä (ts. Noin 4, 2 ° C: n lämpötilassa) ja testaus olisi suoritettava heti käytännöllisestä keräämisen jälkeen (mieluiten 24 tunnin sisällä).

Sivun yläreunassa

Koska suurin osa vedenäytteistä terveydenhuollon laitoksissa käsittää lopullisen veden testaamisen laitoksen jakelujärjestelmästä, pelkistin (ts. Natriumtiosulfaatti [Na2S2O3]) on lisättävä kerätyn näytteen jäännöskloorin tai muun halogeenin neutraloimiseksi. Jos vesi sisältää korkeita määriä raskasmetalleja, näytteeseen tulisi lisätä kelatointiainetta. Kerättävän veden vähimmäismäärän tulisi olla riittävä kaikkien osoitettujen määritysten suorittamiseen; 100 ml katsotaan sopivaksi minimitilavuudeksi. Steriiliä keräyslaitteita tulee aina käyttää.

Näytteitä hanasta edellyttää vesilinjan huuhtelua ennen näytteenottoa. Jos hanat ovat sekoitushanat, lisälaitteet (esim. Seulat ja ilmastointilaitteet) on poistettava, ja kuuma ja sitten kylmä vesi on johdettava hanan läpi ennen näytteenottoa. ⁹⁴⁵ Jos hanan puhtaus on kyseenalaista, desinfiointi 500–600 ppm natriumhypokloriitilla (kloorivalkaisimen laimennus 1: 100 tilavuus / tilavuus) ja hanan huuhtelu tulisi edeltää näytteenottoa.

Valmiin tai käsitellyn veden mikro-organismit ovat usein fysikaalisesti vaurioituneita ("stressaantuneita") siihen pisteeseen, että kasvu on rajoitettua, kun testataan standardiolosuhteissa. Tällaiset tilanteet johtavat vääri-negatiivisiin lukemiin ja harhaanjohtavaan veden laadun arviointiin. Halogeenien asianmukainen neutralointi ja raskasmetallien kelatointi ovat ratkaisevan tärkeitä näiden organismien palautumiselle. Talteenottoväliaineen valinta ja inkubaatio-olosuhteet vaikuttavat myös määritykseen. Inkubointilämpötilojen tulisi olla lähempänä veden ympäröivää lämpötilaa kuin 37 ° C (98, 6 ° F), ja talteenottoväliaineet tulisi formuloida siten, että saadaan sopivia ravintoainepitoisuuksia sellaisten organismien tukemiseksi, joiden kasvu on vähemmän kuin tiukkaa. ^{945 Korkearavinteiset} väliaineet (esim. Veriagar ja tryptinen soija-agar [TSA]) voivat tosiasiallisesti estää näiden vaurioituneiden organismien kasvua. Pelkistetyt ravintoalustat (esim. Laimennettu peptoni ja R2A) ovat edullisia näiden organismien talteenottoa varten. ⁹⁴⁵

Sivun yläreunassa

Aerobisten, heterotrofisten levylukemien käyttö mahdollistaa sekä laadullisen että kvantitatiivisen veden laadun mittauksen. Jos vedessä esiintyvien bakteerimäärien odotetaan olevan suuri (esim. Vedessä esiintyvien tautipesäkkeiden tutkimuksissa), pienten määrien määritys on tehtävä kaatamalla tai levityslevyillä. ⁹⁴⁵ Kalvosuodatusta käytetään, kun odotetaan pienen määrän näytteitä ja vaaditaan suurempia näytteenottotilavuuksia (≥ 100 ml). Näyte suodatetaan kalvon läpi, ja suodatin levitetään suoraan ylöspäin agarlevyn pinnalle ja inkuboidaan.

Toisin kuin juomavesivarusteiden testaamisessa kolibakteerien suhteen (joissa käytetään standardisoituja koe- ja näytteenottoparametreja ja olosuhteita), vedenäytteille tautiepidemioiden epidemiologisten tutkimusten tukemiseksi voidaan tehdä laitoksen olosuhteiden sanelemia muutoksia. Vedessä leviävien patogeenien määritysmenetelmiä ei myöskään voida standardoida. Siksi kontrolli- tai vertailunäytteet olisi sisällytettävä kokeelliseen suunnitteluun. Mahdolliset poikkeamat standardimenetelmästä olisi dokumentoitava täysin, ja ne olisi otettava huomioon tulkittaessa tuloksia ja kehittäessä strategioita. Kliinisesti merkittäville vesiohenteisille taudinaiheuttajille (esim. Legionella spp., Aeromonas spp., Pseudomonas spp. Ja Acinetobacter spp.) Spesifiset määritysmenetelmät ovat monimutkaisempia ja kalliimpia verrattuna molempiin menetelmiin, joita käytetään koliformien havaitsemiseen, ja muihin veden laadun indikaattoreihin.

Sivun yläreunassa

4. Ympäristöpinta-näytteenotto

Rutiininomainen ympäristöpinnanäytteenotto (esim. Seurantaviljelmät) terveydenhuoltoympäristössä ei ole kustannustehokasta eikä perusteltua. ^{951, 1225} Pinta-näytteenotto tulisi suorittaa monitieteellisellä hyväksynnällä huolellisesti harkittujen toimintasuunnitelmien ja politiikkojen mukaisesti (laatikko 15).

Laatikko 15. Ympäristöpinta-näytteenotto *

Seuraavat tekijät tulisi ottaa huomioon ennen ympäristöpinta-näytteenottoa:

• Taustatiedot kirjallisuudesta ja nykyisestä toiminnasta (eli alustavat tulokset epidemiologisesta tutkimuksesta)
• Näytettävien pintojen sijainti
• Näytteenottomenetelmä ja sopivat välineet tätä tehtävää varten
• Tarvitaan toistettavien näytteiden lukumäärä ja mitkä kontrolli- tai vertailunäytteet ovat tarpeen
• Näytteen määritysmenetelmän parametrit ja onko näytteenotto laadullinen, kvantitatiivinen vai molemmat
• Arvio suurimmista sallituista mikrobimääristä tai -tyypeistä näytteistetyllä pinnalla (pinnoilla) (katso laitteiden ja pintojen Spaulding-luokittelu)
• Jotkut korjaavan toimintasuunnitelman odotukset

* Tämän laatikon materiaali on koottu viitteestä 1214.

Sivun yläreunassa

Pintanäytteitä käytetään nykyisin tutkimukseen, osana epidemiologista tutkimusta tai osana kokonaisvaltaista lähestymistapaa erityisiin laadunvarmistustarkoituksiin. Tutkimusvälineenä pinta-näytteenottoa on käytetty määrittämiseen

1. taudinaiheuttajien mahdolliset ympäristösäiliöt, ^{564, 1230–1232}
2. mikro - organismien eloonjääminen pinnoilla, ^{1232, 1233} ja
3. ympäristön saastumisen lähteet. ¹⁰²³

Joitakin tai kaikkia näitä lähestymistapoja voidaan käyttää myös puhkeamistutkimuksissa. ¹²³² Keskustelu lääketieteellisten laitteiden ja välineiden pintanäytteistä on tämän asiakirjan ulkopuolella, ja sitä lykätään sterilointi- ja desinfiointikysymyksiä koskeviin tuleviin ohjeisiin.

Merkitykselliset tulokset riippuvat sopivien näytteenotto- ja määritystekniikoiden valinnasta. ^{1214 Pintanäytteenottoon tarvittavat} väliaineet, reagenssit ja välineet ovat saatavissa mistä tahansa hyvin varustetussa mikrobiologisessa laboratoriossa ja toimittajassa. Pinta-organismien kvantitatiiviseen arviointiin käytetään aerobisten bakteerien palautumiseen ei-selektiivisiä, ravinteisista agarväliaineista ja liemestä (esim. TSA ja aivo-sydäninfuusiolieme [BHI] 5%: n lampaan- tai kaninveriravinteella tai ilman sitä). Liemiväliaineita käytetään kalvosuodatuksen tekniikoiden kanssa. Lisänäytteiden käsittely voi edellyttää selektiivisten väliaineiden käyttöä tiettyjen mikro-organismiryhmien eristämiseksi ja luettelemiseksi. Esimerkkejä selektiivisistä väliaineista ovat MacConkey-agar (MAC [valitsee gram-negatiivisten bakteerien suhteen]), Cetrimide-agar (valitsee Pseudomonas aeruginosaa varten) tai Sabouraud-dekstroosi- ja mallasuuteagarit ja -liemet (valitaan sienille). Organismien kvalitatiivinen määritys pinnalta vaatii vain selektiivisten tai ei-selektiivisten liemeväliaineiden käytön.

Pintojen tehokas näytteenotto vaatii kosteutta, joka on jo näytteenottopinnalla tai kostutettujen pyyhkäisynäytteiden, sienien, pyyhkeiden, agarpintojen tai kalvosuodattimien avulla. ^{1214, 1234–1236} Laimennusnesteet ja huuhtelunesteet sisältävät erilaisia puskureita tai yleiskäyttöisiä liemeväliaineita (taulukko 24). Jos näytteenottopinnoilta odotetaan desinfiointiainejäämiä, niin kasvualustassa kuin laimennus- tai huuhtelunesteissä on käytettävä erityisiä neutralointiaineita. Neutraloivien aineiden, kohde-desinfiointiaineen aktiivisten aineosien ja käyttökonsentraatioiden luettelot on julkaistu. ^{1214, 1237} Vaihtoehtoisesti sen sijaan, että lisättäisiin neutraloivia kemikaaleja olemassa olevaan elatusaineeseen (tai jos desinfiointiaineen jäännösten kemiallista luonnetta ei tunneta), joko

1. kaupallisesti saatavat väliaineet, jotka sisältävät erilaisia spesifisiä ja epäspesifisiä neutraloijia tai
2. kaksoisvahvuinen liemeväliaine helpottaa mikro-organismien optimaalista talteenottoa.

Olisi sisällytettävä asianmukaiset kontrollinäytteet, jotta voidaan estää sekä pinta-desinfiointiaineiden jäljellä oleva mikrobilääkeresistenssi että mahdolliset myrkyllisyydet, jotka aiheutuvat määritysjärjestelmään siirtyneiden neutraloivien kemikaalien läsnäolosta. ¹²¹⁴

Sivun yläreunassa

Taulukko 24. Esimerkkejä eluenteista ja laimennusaineista ympäristöpinnan näytteenottoon * +

Kemialliset liuokset ja suositeltava pitoisuus vedessä.

ratkaisut	Pitoisuus vedessä
Soittoäänen	1–4 vahvuus
Peptonivettä	0, 1% -1, 0%
Puskuroitu peptonivesi	0, 067 M fosfaattia, 0, 43% NaCl, 0, 1% peptonia
Fosfaattipuskuroitua suolaliuosta	0, 02 M fosfaatti, 0, 9% NaCl
Natriumkloridi (NaCl)	0, 25% -0, 9%
Calgon Ringer (Tätä liuosta käytetään kalsiumalginaattinäytteiden liuottamiseen.)	1–4 vahvuus
Tiosulfaatti-Ringer (Tätä liuosta käytetään jäljelle jääneen kloorin neutralointiin.)	1–4 vahvuus
vesi	n / a
Tryptinen soijalieme (TSB)	n / a
Aivosydän-infuusioliemi (BHI), jota on täydennetty 0, 5% naudanlihauutteella	n / a

* Tämän taulukon materiaali on koottu viitteistä 1214 ja 1238.

+ Pinta-aktiivista ainetta (esim. Polysorbaatti [eli Tween® 80]) voidaan lisätä eluenteihin ja laimentimiin. Pitoisuutta, joka vaihtelee välillä 0, 01% –0, 1%, käytetään yleensä erityisestä sovelluksesta riippuen. Vaahtoamista voi tapahtua käytön aikana.

Sivun yläreunassa

Ympäristön pintanäytteiden keräämiseen voidaan käyttää useita menetelmiä (taulukko 25). Kustakin menetelmästä on julkaistu tarkat vaiheittaiset keskustelut. ^{1214, 1239} Parhaiden tulosten saavuttamiseksi kaikissa menetelmissä tulisi olla aseptinen tekniikka, steriili väline ja steriili talteenottoväliaine.

Taulukko 25. Ympäristön pinnan näytteenottomenetelmät

Ympäristön pinnanäytteenottomenetelmät, kuvaukset, standardit ja viitteet.

Menetelmä	Sopii sopivalle pinnalle / pinnoille	Määritystekniikka	Menettelyä koskevat huomautukset	Tulkintapisteet	Käytettävissä olevat standardit	Viitteet
Näyte / huuhtelu (kostutettu tamponi / huuhtelu)	Imeytymättömät pinnat, kulmat, raot, laitteet ja instrumentit	laimennokset; laadulliset tai kvantitatiiviset määritykset	Määritys mittaa useita alueita tai laitteita erillisillä pyyhkeillä	Raportoi tulokset mitattuja alueita kohden tai, jos määritetään objekti, koko näytealueella	KYLLÄ: elintarviketeollisuus; EI: terveydenhoito	1214, 1239-1242
Näyte / huuhtelu (kostutettu sieni / huuhtelu)	Suuret alueet ja siivouspinnat (esim. Lattiat tai seinät)	laimennokset; laadulliset tai kvantitatiiviset määritykset	Hiero steriiliä sieniä voimakkaasti pinnan yli	Raportoi tulokset mitattua aluetta kohti	KYLLÄ: elintarviketeollisuus; EI: terveydenhuolto	1214, 1239-1242
Näyte / huuhtelu (kostutettu pyyhe / huuhtelu)	Suuret alueet ja siivouspinnat (esim. Työtasot)	laimennokset; laadulliset tai kvantitatiiviset määritykset	Käytä steriiliä pyyhettä	Raportoi tulokset mitattua aluetta kohti	KYLLÄ: elintarviketeollisuus; EI: terveydenhuolto	1214, 1239-1242
Suora upotus	Pienet esineet, jotka voidaan upottaa	laimennokset; laadulliset tai kvantitatiiviset määritykset	Käytä kalvosuodatusta, jos huuhtelu on suuri ja odotettavissa oleva mikrobiologinen pitoisuus on pieni	Ilmoita tulokset tuotetta kohden	EI	1214
hillitseminen	Säiliöiden, putkien tai pullojen sisäpinnat	laimennokset; laadulliset tai kvantitatiiviset määritykset	Käytä kalvosuodatusta, jos huuhtelu määrä on suuri	Arvioi sekä mikro-organismien tyypit että lukumäärät	KYLLÄ: ruoka- ja teollisuussovellukset säiliöihin ennen niiden täyttämistä	1214
RODAC (replikoituva suoran agarin yhteys organismiin)	Aiemmin puhdistetut ja desinfioidut tasaiset, imeytymättömät pinnat; ei sovellu epäsäännöllisille pinnoille	Suora määritys	Ylikasvua esiintyy, jos sitä käytetään voimakkaasti saastuneilla pinnoilla; käytä neutralointiaineita agarissa, jos pinnassa on desinfiointiainejäämiä	Tarjoaa suoria, määrällisiä tuloksia; käytä vähintään 15 levyä keskimääräisessä sairaalahuoneessa	EI	1214, 1237, 1239, 1243, 1244

Sivun yläreunassa

Näyte / huuhtelumenetelmät valitaan usein niiden monipuolisuuden takia. Nämä näytteenottomenetelmät ovat kuitenkin alttiimpia virheille, jotka aiheutuvat tamponin, harsotyynyn tai sienen käsittelystä. ¹²³⁸ Lisäksi missään näistä esineistä ei saa olla läsnä mikrobisidisiä tai mikrobiostaattisia aineita näytteenottoa varten. ¹²³⁸ Jokainen huuhtelumenetelmä vaatii mikro-organismien tehokkaan eluoinnin esineestä, jota käytettiin pinnan näytteenottoon. Huuhtelunesteiden perusteellinen sekoittaminen eluoinnin jälkeen (esim. Manuaalisesti tai mekaanisesti sekoittamalla vortex-sekoittimella, ravistamalla lasihelmillä tai ilman ja ultraäänihaute) auttaa poistamaan ja suspendoimaan materiaalin näytteenottolaitteesta ja hajottamaan organismien kohoumia tarkempi laskenta. ¹²³⁸ Joissakin tapauksissa pinnan näytteenottoon käytetty esine (esim. Harsotyyny ja sieni) voidaan upottaa huuhtelunesteisiin steriiliin pussiin ja altistaa oksennukselle. ¹²³⁸ Tämä tekniikka soveltuu kuitenkin vain pehmeille tai imukykyisille esineille, jotka eivät puhkaise pussia eluointiprosessin aikana.

Jos näytteenotto suoritetaan osana tautiepidemian epidemiologista tutkimusta, isolaattien tunnistaminen lajien tasolle on pakollista, ja karakterisointi lajien tason ulkopuolelle on suositeltavaa. ¹²¹⁴ Näytteen tuloksia tulkittaessa on otettava huomioon Spaulding-luokittelussa esiintyvien pinta-alaluokkien odotettu mikrobikontaminaation aste. Ympäristöpintojen tulee olla näkyvästi puhtaita; Tunnistettujen taudinaiheuttajien, joiden lukumäärä on riittävä sekundaarisen siirtämisen muille animaatioille tai elottomille pinnoille, tulee puuttua näytteenottopinnasta. ¹²¹⁴ Vaikka positiivisen mikrobikasvunäytteen tulkinta on itsestään selvää, etenkin siivouspinnoista saatu ympäristöpintanäyte, joka ei osoita kasvua, ei edusta”steriiliä” pintaa. Näytteenotto- ja määritysmenetelmien herkkyys (ts. Havaitsemistaso) on otettava huomioon, kun kasvunäytteitä ei havaita. Oikein kerätyt kontrollinäytteet auttavat estämään pintanäytteen vieraita saastumisia.